关于外泌体需要的相关耗材和试剂

① 收集包含外泌体的悬浮液（如血液、乳汁、尿液等）

② 梯度离心：对悬浮液进行梯度离心，例如按照下表中程序，离心后弃掉底部沉淀，取含包含外泌体的上清液

③ 超高速离心：将②中获得的上清液4℃下以100000 g离心力超高速离心70分钟后，弃上清，在离心管底部加入用500 μL 1×PBS溶液以重悬沉淀并用0.22 μm滤器过滤，收集滤液，即为外泌体悬液

• 普通离心管（常用15ml、50ml）

• 超高速离心管（带盖/不带盖，此处需要考虑超速离心是否有无菌操作要求，所用管子有差别）

• 0.22 μm滤器

• 若外泌体悬浮液不是直接可获取的体液（如血液、乳汁、尿液等），而是要对组织等进行酶解等处理后才可获得，则需要胶原酶、胃蛋白酶或胰酶等试剂处理，同时要考虑到对以上酶的中和（如胃蛋白酶用酸碱性溶液调节使其失活；胰酶用完全培养基中和等）

• 以上流程为最简单的离心流程，目前市面上已有成品化试剂，用于分离外泌体或者提高提取量，可以查找一些相关产品

外泌体的表征：电镜+粒径分析+蛋白标志物测定

① 吸附：吸取外泌体悬液，并将其滴加至附带200目方华膜的铜网上，静置10分钟使其自然吸附，随后用滤纸小心吸除多于的液体。

② 染色：吸取220 μL 2%磷钨酸溶液，并将其滴加在铜网上，静置3分钟以使囊泡被充分染色，随后用滤纸小心吸除多于的液体。

③ 干燥：将铜网置于白炽灯下干燥。

④ 观察拍照：在透射电子显微镜（HT7700，HITACHI，日本）下观察并拍照。

【所需试剂耗材】

• 电镜一般送出，所需物品由检测公司提供（检测一般需要：附带200目方华膜的铜网、滤纸、磷钨酸溶液等）

（二）粒径分析

【所需试剂耗材】

• 一般送出检测，所需物品由检测公司提供（外泌体检测一般需要：PBS）

• PBS

• 一抗（标志物的纳米流式抗体，如CD9、CD63及CD81抗体）

• 荧光二抗

• 锡纸

• EP管、普通离心管、超速离心管（可能会用到）

• 外泌体标志物的WB抗体，如CD9、CD63及CD81抗体）

外泌体与细胞的共培养

【所需耗材】

• 带Transwell小室的孔板（不一定需要用到，也可直接把外泌体加到培养基里）

• 细胞培养板/皿

【所需试剂】

• 基础培养基、血清、双抗

• 其余涉及到细胞功能（如迁移、侵袭、分化、成管、增殖、存活等）的实验所需试剂耗材同之前总结的干细胞相关实验。