体外诊断试剂注册中主要原材料及反应体系研究资料要点23则

1.可以用模拟样本溶液+国际校准品做企业参考品吗？

可以

2.定量参考品可以没有阴性参考品吗？

根据产品性能决定。定量产品参考品一般至少包括准确度参考品、线性参考品、精密性参考品、灵敏度参考品，根据不同产品性能有些还包含特异性参考品、阳性参考品、阴性参考品、亚型检测能力参考品等。

3.在没有国家参考品、已上市试剂盒的情况下，检验病毒类的产品参考品赋值的方法或者单位应该是什么？（TCID50？）

使用生物学单位（TCID50/PFU）用于参考品赋值是目前趋势。企业也可以用数字PCR等方法建立拷贝数（U）与TCID50之间的浓度对应关系后，用拷贝数单位赋值。

4.参考品样本有比较规范的获得方式吗？

建议直接与机构签署科研临床协议获得临床样本。

5.不确定度怎么评估？（多批 效期重复）

不确定度用以表征准确度，此概念多用于定性产品，通常用阳性/阴性符合率表示试剂的准确度。评估不确定度的基本思想是误差的类型对测量结果的使用者来说是不重要的，因为是所有误差的净效应决定测量结果的不确定度，包括整个溯源链中的所有变异分量。对于定性产品。例如产品稳定性研究中，不确定度研究方法是使用多批次产品，在效期内不同阶段，检查参考品的阳性/阴性符合率。

6.引物，探针，dNTP，酶等外购的可以直接用供应商的COA，全部配在一起做一功能性试验吗？还需要按照指导原则和标准做浓度，纯度，碱基缺失率，序列一致性，HPLC吗？

可以用供应商的COA，但不建议一起做功能性试验。

7.主要原材料自身发生变化的，如抗体本身发生变化的，是要重新注册吗？

需要。

8.主要原材料研究和反应体系研究中，是否需要用整套参考品去做，还是有选择性的挑选来做，挑选的原则是怎么样的？

不需要。挑选有代表性的阳性和交叉阴性参考品。

9.请问免疫类试剂盒检测的是病毒的某个抗原（比如结构蛋白），参考品是应该设置为全病毒（活的）还是阴性样品+抗原蛋白？如果参考品是全病毒，赋值应该是对”病毒数“赋值，还是对抗原蛋白含量进行赋值？

优先选择临床样本。对于难以获得可选择毒株，病毒数建议用TCID50或者PFU。

10.做分析性能验证主要原材料需要有2个批次的要求吗？

需要。

11.请问企业参考品需要体现在技术要求中吗（三类IVD）？

需要3个批次转产后的产品。

12.遗传病染色体微缺失微重复的样本赋值采用什么方法？（定性的产品）

用临床参考方法如CMA、FISH等进行赋值。

13.组织切片类标准品如何制备，组织切片做参考品的话，怎么溯源？

制备：购买权威机构认可或发补的有证标准物质（CRM），制造商通过使用标准测量程序测量赋值,将有证参考物质的正确度传递给产品校准品。组织切片参考品溯源：参考品溯源的重点是计算量溯源，及赋值，另外样本信息溯源等。参考品计算量溯源可以通过有证标准物质（CRM）和普遍认可的测量程序来实现。

14.最低检测IFU是怎么做到的？？

例如，可以采用已测定IFU（TCID50或PFU）浓度的样本进行梯度稀释，以95%检出率的最低浓度作为LoD。

15.没有国参的病毒，拷贝数怎么确定？分光光度法跟分子量计算吗？

如有标准物质（计量院等单位购买），采用有证标准物质和数字PCR检测，确定拷贝数；如没有标准物质，可以自己用质粒建立后者直接用数字PCR定量。分光光度法和分子量计算方法精度不够，一般不推荐使用。

16.TCID50，同一种，但不同来源病毒都不一样，与拷贝数关联只能代表已做相关性验证的这个病毒的关系，如何外推至其他同种病毒？

同一来源的病毒株不同生长周期的TCID50和拷贝数关系也不一样，通常选取病毒主要流行地发病期的病毒株进行细胞培养，建立TCID50和拷贝数的关系，其它病毒株以此为参考。

17.请问企业参考品是在产品成型后制备？还是最初制备，引物探针等筛选时采用参考品进行筛选？

企业参考品在转产前原材料研究阶段完成。引物探针等的性能验证试验可能需要使用参考品来验证。

18.USP参考物质可以当作国际标准品吗？

如境内没有可以。一般优先选用拟上市地区认可标准品。

19.企业参考品怎样规避hook效应造成的影响？

先确定HOOK效应的浓度，然后控制参考品浓度。

20.阴性参考品里可以不放交叉样本吗？把交叉放到性能分析里。

阴性参考品需要设置有代表性的交叉样本。特异性研究中需要更全面的研究可能造成交叉反应的型别或类型。

21.核酸类产品组份中有阳、阴性参考品，是由外方一先合成的工程菌，再由外方二进行的扩培后供给我们作为阳、阴参考品的原材料，那我们技术要求中，原材料的供应商怎么写呢？

外方二。

22.工艺性能研究实验时，只做了配套仪器质控，没做申报试剂的质控，有什么影响吗？

工艺及反应体系研究中需要进行体系有效性验证，包括参考品质控体系、检验试验试剂盒质控品质控体系等。

23.企业参考品基质必须要与临床样本保持一致吗？

绝大多数要求一致。也有特殊情况，例如产品是通过多种检测物与各自阈值比较的结果采用算法综合评分出具诊断结果，而人源阴性样本中经常出现随机单种检测物结果高于阈值的情况，然后在提供充分证据后，可以设置单种检测物参考品时其他基质。