PD-L1伴随诊断试剂设计开发思考

近年来，PD⁃1（抗程序性细胞死亡受体1）及其配体PD⁃L1的单克隆抗体已在多种晚期恶性肿瘤的治疗中表现出高效的抗肿瘤活性和可控的安全性，成为了恶性肿瘤治疗的新的里程碑。

本期法荟为您简要介绍国内PD-1/PD-L1药物及PD-L1 IHC伴随诊断试剂在国内的获批情况、PD-L1伴随诊断试剂在设计开发阶段的一些思考。

国内PD-1/PD-L1药物获批情况

NMPA相继批准了9款PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂类药物，50%以上为国产药物。

NMPA批准的PD-L1 IHC伴随诊断试剂

并不是所有患者都能从免疫治疗中获益，因此需要借助特定的生物标志物来筛选适宜人群和预测免疫治疗的疗效。PD‐L1表达是目前应用最广的免疫治疗生物标志物。PD-L1表达检测有伴随诊断和补充诊断用途，伴随诊断（companion diagnostics）用途是指检测PD‐L1表达可指导PD-1和（或）PD‐L1单抗药物的治疗决策，是患者接受特定药物治疗前必须进行的检测，补充诊断（complementary diagnostics）并不要求必须进行的检测，但其结果对临床医师制定治疗方案和预测治疗疗效有重要意义，辅助医生的临床诊疗。FDA/NMPA已经批准了4款PD-L1免疫组织化学法的体外诊断试剂，也都已经在中国上市。其中VENTANA PD-L1（SP263）被FDA批准与尿道上皮癌患者服用度伐利尤单抗后应答率增加有关，作为补充诊断用途，但是被NMPA批准为替雷利珠单抗治疗尿路上皮癌的伴随诊断试剂使用，还被欧盟批准用于NSCLC患者帕博利珠单抗药物一线和二线以及Ⅲ期患者度伐利尤单抗药物的伴随诊断、纳武利尤单抗药物二线的补充诊断。

PD-L1伴随诊断试剂设计开发思考

不同产品检测的细胞类型不尽相同，与疗效相关的PD‐L1阳性判读阈值亦不尽相同，选择抗体的敏感性也不尽相同，这些都对产品的设计开发和性能验证提出了挑战，目前尚未有国产PD-L1免疫组织化学法的伴随诊断试剂获批上市。PD‐L1免疫组织化学检测过程同其他类型抗体的检测过程有类似之处，不在这里赘述，就PD-L1免疫组织化学产品设计开发中的几个思考与大家分享。

1、质量控制：制造商应当在试剂盒中设置质控切片、质控试剂或在说明书中推荐质量控制方案，并在产品设计开发过程建立企业参考品。通常来说，评价免疫组化染色结果不仅要判断结果是否为阳性，还需关注阳性染色细胞类型、细胞区域以及染色程度等信息，所以阳性参考品不仅用于证实目的抗原是否存在，还应根据对照组织提供的信息对抗原表达水平(弱～强)进行评估。在适用的情况下，阳性参考品还要验证免疫组化染色的检测下限(low limit of detection，LLOD)，比如CD20 IHC检测推荐使用阑尾组织作为LLOD对照组织，因其在该组织中的低表达情况。但是上述四个获批产品评分方式均未对染色的强弱情况做要求，评分方法主要以细胞计数为主。

1）PD-L1表达的阳性对照组织通常选择扁桃体组织，这是因为良性扁桃体染色正常时组织内不同区域可以分别呈现阴性、中等、强阳表达，如果符合这个规律则说明检测试剂功能正常。临床诊断剩余人体组织样本是目前最广泛的对照组织来源，但也是有限的，且不同来源波动较大难以稳定和标准化，所以利用同源重组技术获得持续表达不同水平PD-L1细胞株进行质量控制的需求日益增多。如果使用同源重组细胞株作为阳性对照，也建议包埋在蜡块中进行，使整个流程与临床检测流程相符。制造商可以考虑将不同来源、组织类型、表达水平的外部对照样本，做成组织芯片（TMA）的形式这样既能保证组织处理的一致性，也可提供较为全面的信息，从而为免疫组化结果判断提供更可靠的依据。

2）阴性参考品可以为阴性试剂和阴性组织，阴性试剂是指正常检测时用其他试剂代替一抗或二抗，用于判断阳性结果是否特异。阴性组织对照是指已知的不含有目的抗原的组织／细胞，上文所讲良性扁桃体组织其实可以同时实现阴性对照和阳性对照的功能。

2、阅片精密度研究：同其他体外诊断试剂类似，免疫组织化学产品也要对产品的精密度进行研究，考虑不同时间、批次、操作人员、场地、检测平台对检测系统的影响。其中阅片精密度比较特殊，因为免疫组化的检测结果是通过阅片人员专业判读得到，所以除上述精密度研究外临床前需要进行外部重复性研究，对不同场地、不同阅片者的检测结果的精密度进行研究；临床时还要开展环形比对试验，对不同病理医生的读片数据进行总结分析，形成病理医生读片一致性分析报告。

3、阳性阈值：有些免疫组化试剂属于补充诊断类，观测靶标的表达水平有利于临床医生对患者的后续诊疗进行判断，比如Ki67，此类靶标阳性判断值研究仅需进行染色特点的研究。而伴随诊断用途的免疫组化产品阳性判断值研究除需要进行染色特点研究之外，还需要明确后续可进行特定药物治疗的阈值。所以一般PD-L1伴随诊断试剂需要与药物共同开发，按照药物‐疾病‐诊断3D原则，建立起适用于特定的疾病类型、特定的免疫治疗药物以及特定免疫组织化学检测方法的治疗体系，通过开展临床试验筛选出临床获益人群来确定其阳性判断值。

4、其他研究：体外诊断试剂的研究基于对其安全和性能的要求，对于免疫组化类产品来说，保证其性能的核心是一抗抗体的反应性和特异性，其次摸索最佳的染色条件，比如抗原修复、封闭条件、一抗孵育温度和时间等，还要有稳健性和试剂盒的稳定性研究。

目前国内已有像艾德、药明等企业开始与药企联合进行PD-L1伴随诊断试剂盒的开发，期待国产PD-L1伴随诊断试剂能尽快落地开花。