试剂盒选型攻略

一般来说，产品名称上标明种属，且为首个单词，检索种属的常用语言为英文。

如果您需对不同物种的同一因子进行定量，建议优先寻找适用于多个种属的 ELISA 试剂盒，产品介绍中会注明「Multi-species」。

不同厂家验证样本类型不同，即使同一厂家不同试剂盒，其验证样本类型也不尽相同。特别是复杂的血浆样本，根据样本处理方式的差异，分为EDTA血浆、肝素抗凝血浆和柠檬酸盐血浆，因此购买前需仔细核对。

一般来说，待测因子可以根据经验或资料获得参考的检测范围，且正常人与疾病状态存在差异。如热门炎症因子 IL-6，正常人血清中浓度为 3.13 pg/mL，病人会显著增高，CAR-T 回输病人血清中的 IL-6 浓度甚至为正常人的 200 倍以上。

因而，必要时进行样本的稀释及选择合适检测范围的试剂盒极其重要。

若浓度太低，可选择高敏试剂盒;若不确定待测浓度或样本间浓度差异较大，建议使用检测动态范围更宽的化学发光法ELISA试剂盒。

如同样为 IL-6 ELISA 试剂盒，各类型检测范围差异较大，需要根据实际情况选择合适的试剂盒。

·试剂空白吸光度

用蒸馏水做空白，用指定的空白液加入试剂作为样品测试，在测试主波长下，记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟后的吸光度(A2)，A2测试结果即为试剂空白吸光度测定值，应符合生产企业给定范围。这是判定试剂质量的一个有效指标。

·试剂空白变化速率

对于速率法试剂盒，用指定的空白液加入试剂作为样品测试时，在测试主波长下，记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟(T)后的吸光度(A2)，计算试剂空白吸光度变化率(DA/min)，应不超过生产企业给定值。测定试剂空白吸光度变化(ΔA/min)，用来检查试剂在工作状态下的稳定性。但事实上，试剂空白吸光度变化速率无法反映试剂盒的稳定性，试剂空白吸光度变化速率主要反映干扰程度和仪器的稳定性。

·分析灵敏度

用吸光度差值(ΔA)或吸光度变化(ΔA/min)来表示单位浓度的被测物反应所引起的信号变化，其含义类似摩尔消光系数，应符合生产企业给定范围。需要注意的是，分析灵敏度不是越高越好，以适合待测物检测范围为原则。分析灵敏度一般用于批间比较，较能反映制造商的配方、原料的一致性。

·线性范围

取高浓度样品和低浓度样品按不同比例混合成5个浓度做线性试验。线性范围内的分析性能应符合如下要求：①线性性相关系数r应≥0.990;②线性偏差应不超过生产企业给定值。试剂(盒)的线性范围越宽，临床复测几率越小，但与样品/试剂比例成反比。

·重复性

1. 批内重复性 在重复性条件下，用高、中、低三个水平浓度(高、低浓度应超过参考区间20%～30%，中浓度水平在参考区间之内)的控制血清或新鲜人血清测试试剂，重复测试至少10次。

2. 批间重复性 用质量控制血清测试3×3(3个批号，每个批号取3瓶)批间差，较能反映制造商的配方、原料的一致性。干粉或冻干试剂还需测定批内瓶间差，测定同一批号的试剂20瓶，用变异系数(CV)来表示。变异系数(CV)不超过生产企业给定值。

·准确度

1. 相对偏差 直接用试剂盒测定参考物质(平行3次)，评价测定均值与靶值的偏离程度。也可用由参考方法定值的高、中、低三个浓度的人混合血清，用试剂盒平行测定3次，计算均值与定值的相对偏差。

2. 比对试验 既无参考物质、参考血清，也无标准品，也可用比对试验来验证准确度。

·校准品溯源、质控品赋值

1. 校准品溯源性 根据GB/T21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，明确溯源途径。

2. 质控品赋值有效性 质控品的测定结果应在试剂盒规定的范围内。

·稳定性

1. 效期稳定性 取已到效期的试剂盒按以上评价方法对试剂盒性能指标进行评价。

2. 热稳定性试验 生化试剂盒一般置2-8℃保存，为了快速有效地评价试剂盒的稳定性，可以用加速试验来估计。

3. 开瓶稳定性 干粉试剂开瓶后(复溶后)在规定的储存条件下保存至预期时间内，产品的性能至少应符合线性和准确度的要求。